Savillex PFA制品在医学研究上的应用案例（三）
——土拉弗朗西斯菌（兔热病病原体）侵入宿主巨噬细胞的一种新机制研究
说明：本文内容均来源于以下论文
《Francisella tularensis Enters Macrophages via a Novel Process Involving Pseudopod Loops》
作者：Daniel L. Clemens, Bai-Yu Lee, and Marcus A. Horwitz
发表于：《INFECTION AND IMMUNITY》, 2005年9月，第5892–5902页
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Savillex相关PFA实验器皿：
Savillex PFA Jar PFA Closure PFA Well
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Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D细胞培养，可干热灭菌。
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论文摘要（翻译）：
胞内细菌病原体采用多种策略入侵其真核宿主细胞。从超微结构角度看，细菌入侵宿主细胞的途径包括常规吞噬作用、缠绕式吞噬以及皱褶/触发型巨胞饮作用。本文报道了土拉弗朗西斯菌（兔热病病原体）侵入宿主巨噬细胞的一种新机制。该菌是一种传染性极强的兼性胞内寄生菌——仅需10个细菌即可引发人类致命性疾病。然而，其被摄取过程的超微结构特征及介导该过程的受体机制此前尚未见报道。
我们运用荧光显微镜与电子显微镜技术，观察了土拉弗朗西斯菌强毒临床分离株（土拉亚种）及其减毒活疫苗株（LVS，全北亚种）在人巨噬细胞中的黏附与内化过程。研究发现：这两种菌株均通过一种新型吞噬机制侵入巨噬细胞——其特点是不对称的宽松伪足环形成，该机制在超微结构层面区别于所有已知的细菌内化途径。
研究进一步证实：土拉弗朗西斯菌的巨噬细胞黏附与内化高度依赖补体受体及含完整补体C3因子的血清，且该过程需要肌动蛋白微丝参与。这些发现对于理解这种超高传染性病原体的胞内生物学特性及致病机制具有重要意义。
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材料与方法（翻译节选）：
外周血单个核细胞经分离后，调整至3×10⁶个细胞/mL的密度，使用含谷氨酰胺的RPMI 1640培养基（Cellgro）及20%自体血清重悬，置于无菌螺旋盖聚四氟乙烯培养罐（Savillex Corp., Minnetonka, MN）中，于37℃、5% CO₂条件下培养5天备用。使用前将聚四氟乙烯培养罐冰浴冷却，单个核细胞经重悬、洗涤后，使其粘附于盖玻片或塑料组织培养板，或直接用于透射电子显微镜（TEM）摄取实验的悬浮细胞研究。本研究方案中正常人类献血者的参与已获加州大学洛杉矶分校机构审查委员会批准。
图1. 人单核细胞源性巨噬细胞通过宽松伪足环结构吞噬土拉弗朗西斯菌。将活的土拉弗朗西斯菌临床分离株(RCI)与10%新鲜人血清预调理后，离心接种于人外周血单核细胞源性巨噬细胞(A、B和D-F)或分化THP-1细胞(C)，37℃孵育5分钟后固定并进行透射电镜样品处理。使用土拉弗朗西斯菌减毒活疫苗株(LVS)亦获得相似结果。图中标尺均代表1微米。
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