近日，四川大学提出了一种基于稳定同位素检测的无标记CRISPR/Cas9检测方法，实现了对CRISPR/Cas9的高灵敏检测和位点特异性预实验。目前报道的对CRISPR/Cas9的检测主要以放射性同位素标记、荧光染料标记和电化学标记等“标记法”为主。本方法是一种基于稳定同位素检测的“无标记”分析方法，在实现高灵敏检测的同时，简化了分析方法，有利于快速的体外预实验进行。该方法利用基于双链DNA模板合成的无标记铜纳米粒子（dsDNA-CuNPs）代替了传统的化学标记，在保证高灵敏的检测 (LOD=0.13 nM)同时，可以在更短的时间里（35 min）完成分析的过程。
此外，利用CRISPR/Cas9系统的剪切和CuNPs生成对DNA底物高度的特异性,还进一步将这种基于稳定同位素检测的CRISPR/Cas9分析方法用在了位点特异性识别上。他们考察了前间区序列邻近基序（PAM）附件的位点突变，发现只有提供完整的PAM序列，Cas9才能成功识别并保持切割活性。另外，碱基错配导致的由于空间位阻的原因，在剪切位点处的突变也会极大程度影响CRISPR/Cas9的切割性能，这与其他位置表现的突变显示出了明显不同。通过使用不同的脱靶底物设计，这种基于稳定同位素检测的无标记Cas9分析法可以检测潜在的预期之外的切割位点，从而进一步避免脱靶效应。
这一研究不仅可以为CRISPR/Cas9分析提供一种快速简便的分析思路，还可以起到先验分析的作用，裨益进一步的CRISPR/Cas9基因组编辑活体研究。相关研究成果近期发表在Analytical Chemistry 上。
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