Savillex PFA制品在医学研究上的应用案例（八）
——病灶铁沉积在MS中的作用研究
说明：本文内容均来源于以下论文
《Iron Is a Sensitive Biomarker for Inflammation in Multiple Sclerosis Lesions》
作者：Veela Mehta, Wei Pei, Grant Yang, Suyang Li, Eashwar Swamy, Aaron Boster, Petra Schmalbrock, David Pitt
发表于：《PLOS ONE》2013 年 3 月 | 第 8 卷 | 第 3 期 | e57573
Ø
Savillex相关PFA实验器皿：
Savillex PFA Jar PFA Closure PFA Well
Ÿ
Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D细胞培养，可干热灭菌。
Ø
论文摘要（翻译）：
多发性硬化症（MS）患者的MRI相位成像及尸检组织研究均表明白质病灶中存在铁沉积现象。值得注意的是，铁仅在部分病灶中积累的特性提示这一过程具有特异性且可能与疾病进展相关，但其病理生理学意义尚未阐明。本研究通过多维度方法探讨病灶铁沉积在MS中的作用：包括MS尸检组织的免疫组化分析、体外培养人巨噬细胞铁摄取模型，以及高活性期与继发进展期MS患者的超高场强相位成像。
通过普鲁士蓝染色与免疫组化检测发现：
• 铁沉积主要分布于已形成脱髓鞘病灶边缘的非吞噬性巨噬细胞/小胶质细胞中；
• 含铁巨噬细胞（而非富含髓鞘碎片的巨噬细胞）高表达促炎（M1型）极化标志物。
体外巨噬细胞培养实验显示：
铁优先被非吞噬状态的M1极化巨噬细胞摄取，并进一步诱导其M1型超极化；
富含髓鞘碎片的巨噬细胞铁摄取能力显著降低，且活跃的髓鞘吞噬作用会导致胞内铁耗竭。
超高场强MRI梯度回波（GRE）相位成像证实：
• 相位低信号病灶在复发缓解型MS患者中的出现频率显著高于继发进展型患者。
本研究为解读MS患者的铁敏感GRE相位成像提供了理论基础：铁沉积主要存在于慢性活动性脱髓鞘白质病灶边缘的非吞噬性M1极化小胶质细胞/巨噬细胞内。因此，相位成像技术可特异性显示已形成MS病灶中的慢性促炎活性，从而为疾病分期及治疗效果评估提供重要临床信息。
Ø
材料与方法（翻译节选）：
人单核细胞源性巨噬细胞（MDM）培养体系
人外周血单核细胞（PBMC）从美国红十字会提供的白细胞浓缩液中分离获得。将PBMCs（2×10⁶/ml）在含10%胎牛血清（FBS）和20 ng/ml M-CSF的RPMI1640培养基中，于
聚四氟乙烯培养罐（Savillex）内培养6天[1]。
含巨噬细胞的贴壁PBMCs从聚四氟乙烯培养罐中取出，经洗涤后接种于组织培养板。通过贴壁法进一步纯化MDMs，接种2小时后用RPMI培养基充分洗涤去除未贴壁细胞。为诱导向M0型巨噬细胞分化，纯化的单核细胞在含10% FBS和20 ng/ml M-CSF的RPMI1640培养基中培养6天。
随后通过以下处理诱导单核细胞源性巨噬细胞（MDMs）极化：
• M1型极化：LPS（1 μg/ml）联合IFN-γ（100 U/ml）处理3天
• M2型极化：IL-4（20 ng/ml）处理3天
在收获前10小时加入不同浓度（0、25、50、100 μM）的FeCl3。部分实验中，在添加FeCl3前24小时向巨噬细胞培养体系加入纯化的人髓鞘蛋白（30 μg/ml）单独或联合处理。为测定巨噬细胞释放的细胞因子浓度，收集条件培养基离心去除细胞碎片，上清液保存于-80℃备用。特定实验中，向巨噬细胞培养体系加入荧光标记聚苯乙烯微球（直径1 μm；Bangs Laboratories），浓度为1 mg/ml。
[1] Henning LN, Azad AK, Parsa KV, Crowther JE, Tridandapani S, et al. (2008) Pulmonary surfactant protein A regulates TLR expression and activity in human macrophages. J Immunol 180: 7847–7858.
说明：以上仅为论文部分内容节全，如需了解更多内容或获取原文可添加客服微信
chinyeetech
