Savillex PFA制品在医学研究上的应用案例（六）
——外源性HMGB1对HIV-1感染细胞中病毒复制的影响评估
说明：本文内容均来源于以下论文
《HMGB1 activates replication of latent HIV-1 in a monocytic cell-line, but inhibits HIV-1 replication in primary macrophages》
作者：Piotr Nowak, Babilonia Barqasho, Carl Johan Treutiger, Helena Erlandsson Harris, Kevin J. Tracey, Jan Andersson, Anders Sonnerborg
发表于：《Cytokine》第34卷，2006年，第17–23页
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Savillex相关PFA实验器皿：
Savillex PFA Jar PFA Closure PFA Well
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Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D细胞培养，可干热灭菌。
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论文摘要（翻译）：
高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是哺乳动物细胞中含量丰富的蛋白质组分，可通过主动分泌或细胞坏死释放至胞外环境。当炎症细胞和内皮细胞暴露于HMGB1时，会诱导TNF-α和IL-6等细胞因子的释放。为评估外源性HMGB1对HIV-1感染细胞中病毒复制的影响，我们分别建立了潜伏感染和急性感染模型进行研究。
研究发现：在单核细胞系U1（研究HIV-1潜伏感染的经典模型）中，胞外HMGB1以剂量依赖性方式促进HIV-1复制。而地塞米松（U1细胞中NF-κB信号通路的已知抑制剂）可阻断HMGB1对病毒产生的刺激作用。但在HIV-1活跃感染的原代单核细胞中，HMGB1却通过抑制病毒复制表现出相反效应——该意外现象源于HMGB1介导的趋化因子（RANTES、MIP-1α和MIP-1β）释放增加，这些因子已知可抑制HIV-1复制。值得注意的是，当以潜伏感染的T细胞（ACH-2）为靶细胞时，HMGB1的激活效应并未显现。
本研究揭示：胞外HMGB1对单核细胞（而非淋巴细胞）中的HIV-1感染具有双重调控作用，在体外实验中可同时观察到潜伏感染的激活和活跃复制的抑制现象。
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材料与方法（翻译节选）：
2.2 细胞实验
U1细胞系源自U937前单核细胞，这些细胞在HIV-1 LAI/IIIB毒株急性感染导致的细胞病变效应中存活。该细胞系整合有两拷贝的HIV-1前病毒DNA，其特征是基础病毒表达水平较低，但可被多种细胞因子和佛波酯上调。ACH-2细胞系是通过类似方法获得的T淋巴细胞源性细胞系。这两个细胞系均由英国NIBSC艾滋病试剂项目提供。细胞培养采用含10%胎牛血清(FCS)的RPMI 1640培养基，并添加青霉素和链霉素(100 U/ml)。
外周血单个核细胞(PBMCs)通过无内毒素Ficoll-Paque密度梯度离心法(Amersham Pharmacia Biotech Uppsala, Sweden)从健康成人献血者的白细胞层中分离。采用Percoll分离法从PBMCs中筛选单核细胞[15]。流式细胞仪检测确认CD14阳性细胞比例超过90%。随后将细胞以0.5-1×10⁶/ml密度接种于24孔板(Costar, Denmark)。
单核细胞在含20% FCS的RPMI培养基(添加青霉素和链霉素100 U/ml)中培养7天，分化为单核细胞源性巨噬细胞(MDM)。分离一周后，强力洗涤MDM细胞，分别用50μl或200μl HIV-1 BAL分离株(原液浓度为1.3×10⁸病毒颗粒/ml)处理2小时，之后充分洗涤。攻击4天后通过逆转录酶(RT)活性检测(Caviditec, Uppsala, Sweden)确认HIV-1感染。为避免MDM贴壁塑料引起的免疫激活，MDM培养(包括感染和刺激实验)均在硅化处理的
聚四氟乙烯培养罐(Savillex, USA)中进行，方法参照文献。
说明：以上仅为论文部分内容节全，如需了解更多内容或获取原文可添加客服微信
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