Savillex PFA制品在医学研究上的应用案例（七）
——铁元素在嗜肺军团菌对单核细胞内生物学行为中的作用研究
说明：本文内容均来源于以下论文
《Interferon gamma-activated human monocytes downregulate transferrin receptors and inhibit the intracellular multiplication of Legionella pneumophila by limiting the availability of iron.》
作者：Thomas F. Byrd and Marcus A. Horwitz
发表于：《J Clin Invest》 1989；83(5):1457-1465.
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Savillex相关PFA实验器皿：
Savillex PFA Jar PFA Closure PFA Well
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Savillex PFA制品优势：极低吸附性及化学惰性利于3D细胞培养，可干热灭菌。
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论文摘要（翻译）：
我们研究了铁元素在嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）人单核细胞内生物学行为中的作用，以及其在针对该胞内病原体的细胞免疫防御效应机制中的功能。
为探究嗜肺军团菌的胞内增殖是否依赖铁元素，我们采用铁螯合剂去铁胺（deferoxamine）处理感染单核细胞的嗜肺军团菌。结果显示：
1. 15 μM去铁胺能完全抑制嗜肺军团菌的胞内增殖；
2. 该抑制作用可被等摩尔量铁饱和转铁蛋白（iron-saturated transferrin）逆转，但不被脱铁转铁蛋白（apotransferrin）逆转。
在探究铁元素对单核细胞活化作用时，我们发现：
• 铁饱和转铁蛋白（而非脱铁转铁蛋白）能中和γ-干扰素（IFNγ）活化单核细胞对嗜肺军团菌增殖的抑制能力。
通过研究活化单核细胞限制胞内铁可利用度的潜在机制，我们检测了体外培养5天的活化与非活化单核细胞的转铁蛋白受体表达：
· 荧光激活流式细胞术显示：活化单核细胞的转铁蛋白受体数量显著少于非活化细胞；
· ¹²⁵I-转铁蛋白结合实验的Scatchard分析表明：
o 非活化单核细胞具有38,300±12,700个转铁蛋白结合位点（均值±标准误）
o 活化单核细胞仅含10,300±1,600个结合位点（减少73%）
o 两组细胞的平均解离常数（Kd）相似（1.8±0.2 nM）。
本研究证实：
① 嗜肺军团菌胞内增殖具有铁依赖性；
② 活化单核细胞通过限制胞内铁可利用度抑制病原菌增殖；
③ IFNγ活化的单核细胞下调转铁蛋白受体表达。
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材料与方法（翻译节选）：
流式细胞术检测活化与非活化单核细胞转铁蛋白受体表达实验
采用前述方法制备富集单核细胞的悬液，以1.5-2.0×10⁶/ml的浓度接种于
螺旋盖聚四氟乙烯培养罐（Savillex Corp., Minnetonka, MN）中，使用含20%自体人血清的RPMI培养基，并添加IFN-γ（2μg/ml）或对照培养基（PBS-BSA）。培养罐保持松散盖合状态，细胞在37℃、5% CO₂-95%空气条件下培养5天。尽管本文仍称这些细胞为单核细胞，但已知其在培养成熟过程中已具备组织巨噬细胞的诸多特征。
培养5天后，将聚四氟乙烯培养罐置于冰上30分钟。随后收集单核细胞悬液，使用不含Ca²⁺和Mg²⁺离子的PBS（含2% FCS和0.1%叠氮化钠）在4℃条件下以200g离心10分钟，洗涤两次。细胞计数后，分装至三组平行试管（2×10⁵细胞/管），4℃ 150g离心5分钟，用100μl含50%人AB血清（Irvine Scientific, Santa Ana, CA）的PBS重悬。
三组试管分别进行如下处理：
第一管：加入荧光素标记的小鼠抗转铁蛋白受体IgG2a单克隆抗体（L01.1；Becton Dickinson Immunocytometry Systems, Mountain View, CA）
第二管：加入荧光素标记的小鼠抗钥孔血蓝蛋白IgG2a单克隆抗体（Becton Dickinson Immunocytometry Systems）作为同型对照
第三管：不添加抗体以检测自发荧光
所有试管均在4℃避光孵育30分钟，洗涤两次后用500μl PBS重悬。随后使用流式细胞仪（Epics C; Coulter Electronics Inc., Hialeah, FL）进行分析，仪器配备488nm氩激光器（功率300mW），绿色光电倍增管前设置525/20nm带通滤光片。通过前向散射和侧向散射设门排除淋巴细胞、细胞碎片、聚集体及非活细胞，每个样本检测5,000个单核细胞的对数荧光强度并以频率分布直方图显示。未加抗体组与同型对照抗体组的单核细胞均显示相似的低水平荧光。
说明：以上仅为论文部分内容节全，如需了解更多内容或获取原文可添加客服微信
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